今天探索吧就给我们广大朋友来聊聊检验N的方法,以下关于观点希望能帮助到您找到想要的答案。
如何鉴定DNA和RNA(生物)具体做法
最佳答案高中粗鉴定:用吡罗红(DNA)和甲基绿(RNA)鉴定.
DNA的鉴定
(1)配制二苯胺试剂:取0.1 mL B液;滴入到10 mL A液中,混匀.
(2)鉴定:取4 mL DNA提取液放入试管中,加入4 mL二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝).用沸水浴(100℃)加热10 min.在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色).
附1:研磨液的配制方法
Tris:10.1 g(相对分子质量为121.4),先加50 mL蒸馏水溶解,用物质的量浓度为2 mol/L的盐酸调至pH=8.0,再加下述药品.
NaCl:8.76 g(相对分子质量58.44)
EDTA:37.2 g(相对分子质量372.24)
SDS:20 g(相对分子质量288.3)
待上述药品全部溶解后,再用蒸馏水定溶至1000 mL.
若在室温低于20℃时配制药液,SDS呈沉淀析出,此时需要加温,才能将SDS溶解.如果提前配制的研磨液出现了沉淀,则应加温使沉淀溶解后再使用.
附2:研磨液中几种药品的作用
SDS(十二烷基磺酸钠):可使蛋白质变性,与DNA分离.
EDTA(乙二胺四乙酸二钠):为DNA酶的抑制剂,可以防止细胞破碎后DNA酶降解DNA.
物质的量浓度为0.15 mol/L的氯化钠溶液:能很好地溶解DNA.
Tris/HCl:提供缓冲体系,DNA在这个缓冲体系中呈稳定状态.(Tris为三羟甲基氨基甲烷)
RNA的鉴定
取RNA沉淀约O.2 g,加2 ml 10%H2SO4→沸水浴中加热2 min→加1.5 ml地衣酚试剂→沸水浴中加热→观察颜色变化。
真核细胞RNA的分离和鉴定
最佳答案酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
目的:
1.掌握稀碱(NaOH)法分离酵母RNA的原理与方法
2.了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。
二、原理:酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液,在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解,然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA。提取的RNA有不同程度的降解。由此即得到RNA的粗制品。
三、器材
四、试剂和材料
将2mL 10%三氯化铁溶液(用FeCl3·6H2O配制)加入 到400 mL浓盐酸中。
9.苔黑酚乙醇溶液 10 mL :溶解6g苔黑酚于100 mL 95%乙醇中(可在冰箱中保存1个月)。
10.酵母粉 200 g
11.地衣酚(3,5—二羟甲苯试剂):取比重1.19HCl 100ml,加入FeCl3·6H20 100mg及二羟甲苯100mg,混匀溶解后,置于棕色瓶中,此试剂必须在临用前新鲜配制。
五、操作
1.将15g酵母悬浮于90 mL 0.04 mol/L氢氧化钠溶液 中,并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150毫升锥形瓶 中。在沸水浴上加热30分钟后,冷却。离心(3000 r/min)15分钟,将上清液缓缓倾入30 mL酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后,离心(3000 r/min)3分钟。弃去清液。用95%乙醇洗涤沉淀两次,乙醚洗涤沉淀一次后,再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。
2.核糖的鉴定:取试管两只,分别标明测定管与对照管,然后依次加入下列各试剂。
管 号 RNA水解液 5%H2SO4 3,5-二羟甲苯
测定管 4滴 不加 6滴
对照管 不加 4滴 6滴
将两试管放入沸水浴内加热10分钟,比较两管之颜色。
实验结果
测定管由黄色变成绿色为阳性反应,对照管没有明显颜色反应。
注意事项
1.样品倒入玻璃离心管不能太满;
2.离心前玻璃离心管(套上塑料管套)放在天平上平衡好;
在高中生物研究中,会用染色鉴定物质。蛋白质,脂肪,还原糖,淀粉,RNA分需要什么试剂鉴定?什么颜色?
最佳答案1、二苯胺:用于DNA的鉴定(沸水浴,蓝色)
2、甲基绿:检测DNA,呈绿色
3、吡罗红:检测RNA,呈红色
4、苔黑酚乙醇溶液:用于RNA的鉴定
5、斐林试剂(甲液0.1g/mL NaOH、乙液0.05g/mLCuSO4)/班氏试剂:鉴定可溶性还原性糖(沸水浴,砖红色沉淀)
6、双缩脲试剂:用于蛋白质的鉴定(紫色)
7、苏丹Ⅲ染液(橘黄色)和苏丹Ⅳ染液(红色):用于脂肪鉴定
8、碘液:用于鉴定淀粉(变蓝色)
9、龙胆紫溶液或醋酸洋红:碱性染料,用于染色体染色时,前者呈深蓝色,后者呈红色
0、改良苯酚品红染液:检测染色体,红色
11、健那绿B:检测线粒体,专一性让线粒体染色呈蓝绿色
12、重铬酸钾溶液:检测酒精,呈灰绿色
13、溴麝香酚蓝水溶液:检测CO2,由蓝变绿再变黄
14、吲哚酚试剂:用于维生素C的鉴定
15、伊红美蓝:鉴定有无大肠杆菌的存在
16、亚甲基蓝:用于活体染色或检测污水中的耗氧性细菌(细菌的氧化可使之褪色)
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